Calculadora de Concentració de Proteïnes

Autor: Henrick Yau

Calculadores

Els valors típics oscil·len entre 0.5 i 2.0
Les cubetes estàndard tenen una longitud de pas d'1 cm
Si la mostra es va diluir abans del mesurament (p. ex., 5 = dilució 1:5)

La concentració de proteïna mitjançant l'absorbància a 280 nm (A280) es determina utilitzant la Llei de Beer-Lambert:

\[ C = \frac{A}{\epsilon \times l} \]

on:

  • \( C \) = Concentració de proteïna (mg/mL)
  • \( A \) = Absorbància a 280 nm
  • \( \epsilon \) = Coeficient d'extinció (L·g⁻¹·cm⁻¹)
  • \( l \) = Longitud del camí de la cubeta (cm)

Què és el Calculador de Concentració de Proteïna?

El Calculador de Concentració de Proteïna ajuda a determinar la concentració de proteïna utilitzant diferents mètodes, incloent:

  • Absorbància a 280 nm (A280): Un mètode ràpid i no destructiu basat en aminoàcids aromàtics.
  • Assaig de Bradford: Un mètode colorimètric que utilitza la unió de colorants.
  • Assaig BCA (Àcid Bicinconínic): Un mètode que es basa en la reducció de coure i la detecció colorimètrica.
  • Assaig de Lowry: Un enfocament ben establert que utilitza interaccions proteïna-coure.

Passos per calcular la concentració de proteïna

Segueix aquests passos per calcular la concentració de proteïna:

  • Selecciona el mètode de mesura (A280, Bradford, BCA o Lowry).
  • Introdueix els valors requerits com l'absorbància, el factor de dilució i el coeficient d'extinció (si cal).
  • Si utilitzes un mètode de corba estàndard (Bradford, BCA o Lowry), introdueix els paràmetres de la corba.
  • Fes clic al botó "Calcular" per obtenir el resultat de la concentració.

Beneficis d'Utilitzar el Calculador

  • Estalvia temps automatitzant els càlculs de concentració.
  • Admet múltiples mètodes de mesura per a flexibilitat.
  • Inclou un calculador de dilució per preparar concentracions específiques.
  • Redueix l'error humà en càlculs manuals.

Preguntes sobre el càlcul de concentració de proteïnes

1. Quina precisió té el mètode d'Absorbància (A280)?

El mètode A280 és generalment precís per a proteïnes pures, però pot veure's afectat per contaminants com els àcids nucleics.

2. Puc utilitzar l'Assaig de Bradford per a totes les proteïnes?

L'Assaig de Bradford funciona bé per a la majoria de proteïnes, però pot donar resultats variables segons la composició de la proteïna.

3. Quin és l'avantatge de l'Assaig BCA?

El mètode BCA és més compatible amb detergents i té un rang lineal més ampli que el de Bradford.

4. Com escullo el coeficient d'extinció correcte per a A280?

Utilitza valors publicats per a proteïnes conegudes, o calcula el coeficient d'extinció basant-te en la composició d'aminoàcids.

5. Per què necessito un factor de dilució?

Si la teva mostra es dilueix abans de la mesura, has de multiplicar la concentració calculada pel factor de dilució per obtenir la concentració final correcta.